液相梯度设置 | 高效液相如何设置流动相梯度

1. 高效液相如何设置流动相梯度

正相色谱选择原则与反相色谱相仿,正己烷相当于是在反相色谱中的水相,而乙醇、四氢呋喃或氯仿等相当然于反相色谱中的乙腈或甲醇,三氟乙酸和三乙胺也是用来调节PH值的,但有一个问题要注意,一般正相色谱不用缓冲盐,因为正相色谱一般只用有机溶剂,不用水相,所以与缓冲盐不溶解.而通常正乙烷的量都是超过50%的.根据样品的结构,酸式样品加酸调节流动相,碱式样品加碱调整流动相.

正相色谱流动相不能做梯度,因为基线漂移太大.还有正相色谱中很大的一个应用是进行手性检测,手性检测根据柱子的要求对于是流动相的要求也非常高.

总之,正相色谱的使用在液相色谱中使用相对来说没有反相色谱使用广泛,使用之前一定多看色主谱柱的使用说法

2. 高效液相常用流动相

1.换上足量新的流动相或超纯水；

2.拧开排气阀，开大流速进行排气，如果泵不能吸液，可以拧开出口单向阀的出口螺丝，直至有液体流出再拧紧（建议用注射器把溶剂过滤头到比例阀入口那段管路的气泡抽光，免得柱塞杆长时间干跑而损坏柱塞杆）；

3.把柱子换成双通，不接流通池，拧紧排气阀，开大流速把系统管路里的气泡冲走；

4.调到2的流速，接上流通池，冲洗下流通池；

5.接上柱子，用纯甲醇以1的流速冲洗色谱柱，直至基线稳定，确认柱子没气泡为止。

3. 液相流动相配置

可以，只要流动相配比合理，是可以添加异丙醇的。异丙醇有很强的洗脱和溶解能力，在液相色谱应用中经常扮演冲洗残留物，恢复系统清洁的清道夫角色。

但是如果作为流动相，由于其粘度过高，经常导致柱压升高，高压下色谱柱填料容易塌陷，所以大家对异丙醇的使用都非常的谨慎。

异丙醇作为流动相的组成，最应该考虑的就是柱压，因为他的加入会直接导致系统压力升高，这就需要异丙醇的比例不宜太高。如何寻找合适的配比比较重要。另外有机相最好不要只用异丙醇，可以用乙腈或甲醇配合异丙醇使用。

4. 液相浓度梯度设置

使用液相色谱仪进行分析时，常用两种洗脱方式，一种为等度洗脱，另一种为梯度洗脱。

用等度洗脱进行色谱分离时，由不同溶剂构成的流动相的组成，如流动相的极性、离子强度、pH值等，在分离的全过程中皆保持不变。用梯度洗脱进行色谱分离时，在洗脱过程中含2种或两种以上不同极性溶剂的流动相组成会连续或间歇地改变，其间可调节流动相的极性，改善样品中各组分间的分离度。

使用梯度洗脱时，也会使干扰分离的强保留杂质组分在较短的时间内从柱中清楚，使色谱柱保持干净状态，以进行下一次的分析。

5. 液相方法开发梯度选择

需要根据你的方法标准设置流动相流速，流动性的组成，或者设置流动相的梯度洗涤，进样口进样量的设置，泵温，还有就是设置检测器的波长！

6. 高效液相怎么调梯度

呵呵，你说能看明白。

你举这个例子不是特别的恰当了。我给我举个例子，希望能帮助你。时间 A B 0 80 20 10 10 90 14 10 90 14.1 80 20 20 80 20 这个例子能说明你的问题，前面0-10分钟采用的梯度是等比例的把A80%和B20%变换成A10%和B90%，而当10分钟时，已经变换成了A10%和B90%，这只是梯度变换成了这个比例，实际上，因为液相色谱的死时间问题，在柱子中的比例还没到这样的比例，再就是现在这个比例应该是有机相最多的时候，这时会把一些难于洗脱的物质洗脱出来，一般还需要几分钟的时间吧，然后过了四分钟，觉得洗脱完全了，就在14.1分钟立即把梯度换成了A80%和B20%，接下来其实现在已经不在分析样品了，是在平衡系统了。在实际运行中，我做的这个梯度只有14分钟再加上大约2分钟的死时间，也就是说大约16分钟的时间是整个样品中的谱图正常时间，16分钟之后不可能再有峰出来了，如果有峰说明方法梯度设置有问题了。而你上面的梯度其实是个等度，设置这个梯度没意义，可以都删除，直接在AB泵上设置就行了。